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食毛剂活力的测定方法

文章出处:永利皇宫官网责任编辑:人气:-发表时间:2016-08-11 17:09【

食毛剂为纤维素酶,用于改善布面光泽度,提高布面的光亮风格,那么食毛剂的能够去除多少布面绒毛呢,这个就要分辨出食毛剂的活力,那么活力是怎么测定呢,本文简单简述测定方法:

1.滤纸崩溃法

1> 原理

    纤维素酶能分解滤纸,产生葡萄糖等还原糖,与35-二硝基水杨酸显色剂作用,可生成橙黄色络合物,用比色法能够定量测定还原糖的生成量。本方法在最适条件下,以单位时间内一定量的酶制剂释放出的葡萄糖量,来表示纤维素酶制剂的活力。

2> 试剂

2.1>  35-二硝基水杨酸显色剂

称取10g 35-二硝基水杨酸(熔点168-169℃,若熔点偏低,则应重结晶,方法是称取10g 35-二硝基水杨酸,加50mL水,加热溶解,冷却析出结晶,过滤,用冷水洗涤,干燥后得白色结晶),溶于蒸馏水中,加入20 g氢氧化钠,200 g酒石酸钾钠,加水500 mL,加热溶解后,加入重蒸酚2g、无水亚硫酸钠0.5 g,加热搅拌,待全部溶解后,冷却,移到1000 mL容量瓶中,稀到刻度,放置一周后过滤备用。此显色剂应贮存于棕色瓶中。

2.2>  缓冲溶液

0.04MpH值为4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液。

3> 方法

3.1> 酶液制备

按工艺要求的浓度、pH值等配制酶处理液。

3.2> 酶解

分别吸取酶处理液00.51.01.52.0mL,置于试管中,用pH值为4.5 的醋酸-醋酸钠缓冲溶液补足到2.0 mL。置于40℃水浴中保温数分钟后,在每管酶液中加入1×25px2的新华1号层析滤纸6片,立即记时,准确反应60min,然后立即在沸水浴中加热10min,使酶失活。

3.3> 显色

    在上述每管酶解液中,加入3 mL 35-二硝基水杨酸显色剂,在沸水中加热15 min,冷却,加蒸馏水10 mL,摇匀,用分光光度计在550 nm波长下,用1 cm比色皿,以空白为对照,测定其光密度。以光密度为纵坐标,各管酶浓度为横坐标作图,应成一通过原点的直线。取直线上任意一点计算即可。如成曲线关系(直线弯曲),应将酶液进一步稀释后再进行测定。

3.4> 葡萄糖标准曲线绘制

    准确配制1000μg/ mL葡萄糖标准溶液。分别取00.100.200.30┄┄0.70 mL葡萄糖标准溶液,用蒸馏水补足到2.0 mL,加3 mL  35-二硝基水杨酸显色剂,同上进行显色、比色,以光密度(O.D.550nm)为纵坐标,葡萄糖微克数为横坐标作图,应得一直线。

3.5> 计算

    在上述酶浓度和光密度对应的直线上取酶量W,对应O.D.550nm在葡萄糖标准曲线上查得葡萄糖的微克数A,按下列公式进行计算:

A

纤维素酶活力(单位/g= ────-

t×W

式中:A —由标准曲线查出释放葡萄糖的量,μg

      t —酶解所用的时间,min

      W —反应中含酶量,g(若原酶制剂为液体,则以mL计,同时酶活力单位以单位/ mL计)。

单位定义:在上述条件下(pH值为4.5,温度为40℃),每分钟分解滤纸产生1μg葡萄糖的酶量,为1单位的酶。


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